Alt iLive-innhold blir gjennomgått med medisin eller faktisk kontrollert for å sikre så mye faktuell nøyaktighet som mulig.
Vi har strenge retningslinjer for innkjøp og kun kobling til anerkjente medieområder, akademiske forskningsinstitusjoner og, når det er mulig, medisinsk peer-evaluerte studier. Merk at tallene i parenteser ([1], [2], etc.) er klikkbare koblinger til disse studiene.
Hvis du føler at noe av innholdet vårt er unøyaktig, utdatert eller ellers tvilsomt, velg det og trykk Ctrl + Enter.
Restriksjonsfragmentlengdepolymorfismeanalyse
Medisinsk ekspert av artikkelen
Sist anmeldt: 05.07.2025
Den utbredte bruken av ulike restriksjonsendonukleaser for analyse av kromosomalt DNA har avslørt den enorme variasjonen i det menneskelige genomet. Selv små endringer i de kodende og regulatoriske regionene til strukturelle gener kan føre til at syntesen av et bestemt protein opphører eller at dets funksjon i menneskekroppen tapes, noe som vanligvis påvirker pasientens fenotype. Imidlertid består omtrent 90 % av det menneskelige genomet av ikke-kodende sekvenser, som er mer variable og inneholder mange såkalte nøytrale mutasjoner, eller polymorfismer, og ikke har noen fenotypisk uttrykk. Slike polymorfe regioner (loci) brukes i diagnostisering av arvelige sykdommer som genetiske markører. Polymorfe loci er tilstede i alle kromosomer og er knyttet til en spesifikk region av genet. Ved å bestemme lokaliseringen av et polymorf locus er det mulig å fastslå hvilket gen som er assosiert med mutasjonen som forårsaket sykdommen hos pasienten.
For å isolere polymorfe DNA-regioner brukes bakterielle enzymer - restriktaser, hvis produkt er restriksjonssteder. Spontane mutasjoner som oppstår i polymorfe steder gjør dem resistente eller omvendt følsomme for virkningen av en spesifikk restriktase.
Mutasjonsvariabilitet i restriksjonssteder kan oppdages ved å endre lengden på restriksjonsfragmenter av DNA ved å separere dem ved hjelp av elektroforese og påfølgende hybridisering med spesifikke DNA-prober. I fravær av restriksjon i et polymorf sted, vil ett stort fragment bli oppdaget på elektroforegrammer, og i dets nærvær vil et mindre fragment være tilstede. Tilstedeværelsen eller fraværet av et restriksjonssted i identiske loci av homologe kromosomer muliggjør ganske pålitelig merking av det mutante og normale genet og sporing av dets overføring til avkom. Når man studerer DNA hos pasienter i begge kromosomene der et restriksjonssted er tilstede i en polymorf region, vil derfor korte DNA-fragmenter bli oppdaget på elektroforegrammet. Hos pasienter som er homozygote for en mutasjon som endrer det polymorfe restriksjonsstedet, vil lengre fragmenter bli oppdaget, og hos heterozygote pasienter, korte og lange fragmenter.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]