Karyotyping

Korttidsblodkulturer, benmargsceller og fibroblastkulturer brukes oftest til å studere kromosomer. Blod med et antikoagulant som leveres til laboratoriet sentrifugeres for å sedimentere erytrocyttene, og leukocyttene inkuberes i et kulturmedium i 2–3 dager. Fytohemagglutinin tilsettes blodprøven, da det akselererer agglutineringen av erytrocytter og stimulerer lymfocyttdeling. Den mest passende fasen for å studere kromosomer er metafasen av mitosen, så kolkisin brukes for å stoppe delingen av lymfocytter på dette stadiet. Tilsetning av dette legemidlet til kulturen fører til en økning i andelen celler i metafasen, det vil si på det stadiet av cellesyklusen når kromosomene er mest synlige. Hvert kromosom replikerer (produserer sin egen kopi) og er etter passende farging synlig som to kromatider festet til sentromeren, eller den sentrale innsnevringen. Cellene behandles deretter med en hypotonisk natriumkloridløsning, fikseres og farges.

For farging av kromosomer brukes oftest Romanovsky-Giemsa-fargestoff, 2 % acetarmin eller 2 % acetarsein. De farger kromosomene fullstendig og jevnt (rutinemetoden) og kan brukes til å oppdage numeriske avvik i menneskelige kromosomer.

For å få et detaljert bilde av kromosomstrukturen, identifisere (definere) individuelle kromosomer eller deres segmenter, brukes ulike metoder for differensiell farging. De mest brukte metodene er Giemsa, samt G- og Q-båndfarging. Når man undersøker preparatmikroskopi langs kromosomets lengde, avsløres et antall fargede (heterokromatin) og ufargede (eukromatin) bånd. Arten av den tverrgående striasjonen som oppnås på denne måten, gjør det mulig å identifisere hvert kromosom i settet, siden vekslingen av bånd og deres størrelser er strengt individuelle og konstante for hvert par.

Metafaseplatene til individuelle celler fotograferes. Individuelle kromosomer klippes ut fra fotografiene og limes i rekkefølge på et ark; dette bildet av kromosomer kalles en karyotype.

Bruk av tilleggsfarging, samt nye metoder for å oppnå kromosompreparater som tillater strekking av kromosomer, øker nøyaktigheten av cytogenetisk diagnostikk betydelig.

En spesiell nomenklatur er utviklet for å beskrive den menneskelige karyotypen. Den normale karyotypen for en mann og en kvinne er betegnet som henholdsvis 46, XY og 46, XX. Ved Downs syndrom, karakterisert ved tilstedeværelsen av et ekstra kromosom 21 (trisomi 21), beskrives kvinnens karyotype som 47, XX 21+, og mannens er 47, XY, 21+. Ved strukturell anomali i kromosomet er det nødvendig å indikere den endrede lange eller korte armen: bokstaven p betegner den korte armen, q betegner den lange armen, og t betegner translokasjonen. Ved sletting av den korte armen på kromosom 5 (cri du chat-syndrom) beskrives dermed den kvinnelige karyotypen som 46, XX, 5p-. Moren til et barn med translokasjon Downs syndrom, bærer av den balanserte translokasjonen 14/21, har en karyotype på 45, XX, t(14q; 21q). Translokasjonskromosomet dannes ved sammensmelting av de lange armene til kromosom 14 og 21, og de korte armene går tapt.

Hver arm er delt inn i regioner, som igjen er delt inn i segmenter, som begge er betegnet med arabiske tall. Kromosomets sentromer er utgangspunktet for telling av regioner og segmenter.

Dermed brukes fire etiketter for kromosomtopografi: kromosomnummer, armsymbol, regionnummer og segmentnummer innenfor regionen. For eksempel betyr oppføringen 6p21.3 at vi snakker om kromosom 6 i det 6. paret, dets korte arm, region 21, segment 3. Det finnes også flere symboler, spesielt pter - enden av den korte armen, qter - enden av den lange armen.

Den cytogenetiske forskningsmetoden tillater kun deteksjon av delesjoner og andre endringer i kromosomer med en størrelse på omtrent 1 million baser (nukleotider).

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]